■ Ho feto-fetoha le maemo ho hoholo: Boholo ba mofuta oa sampole ea ho qala, bo loketseng sampole e kholo ea sampole ka karabelo e le 'ngoe.
■ chai e ngata: Mokhoa oa ho na pula o eketsa chai ea RNA ka sampole.
Ts'ebeliso e pharalletseng: E loketse mehlala e mengata e fapaneng joalo ka lisele tsa limela le tsa liphoofolo, lisele tse tsoetseng pele, mali, mokelikeli oa 'mele, jj.
■ Ts'ebetso e potlakileng: Genomic DNA e ka fumaneha nakong ea hora e le 'ngoe ..
Mofuta: Pula e thehiloe
Sampole: Kokoana-hloko, libaktheria, fungus, liphoofolo, lisele tsa semela, lisele tse tsoetseng pele le mokelikeli oa 'mele.
Sepheo: RNA
Nako ea ts'ebetso: ~ Hora e le 'ngoe
Likopo: TRNzol Universal reagent e fokotsa tšilafalo ea litšila tse kang DNA le liprotheine ho RNA e hloekisitsoeng, mme e ka sebelisoa ka kotloloho bakeng sa liteko tse fapaneng tsa limolek'hule tse kang Northern Blot, Dot Blot, ho hlahloba PolyA, phetolelo ea vitro, tlhahlobo ea ts'ireletso ea RNase, kaho ea laeborari ea cDNA , RT-PCR, PCR ea nako ea 'nete le tatellano e phahameng ea tšebetso.
Lihlahisoa tsohle li ka fetoloa bakeng sa ODM / OEM. Bakeng sa lintlha,ka kopo tlanya Customized Service (ODM / OEM)
Mokhoa: 30 mg, lisele tsa sebete sa rat, makhasi a raese a 100 mg a ile a bokelloa ka ho sila haetrojene ea metsi; 1 × 106Lisele tse ntlafalitsoeng tsa HepG2 le 700 μl Saccharomyces Cerevisiae setso se mahareng (OD600 = 0.9) li ile tsa bokelloa ka centrifugation. 1 ml ea TRNzol Universal Reagent e tsoang TIANGEN le lihlahisoa tse amehang tse tsoang ho mofani oa thepa L le T li kentsoe ho aliquot e ngoe le e ngoe ea sampole le ho ntšoa ha RNA ho ile ha etsoa kamora melaoana e fanoeng ke mofani e mong le e mong. Molumo oa elution e ne e le 80 μl, 50 μl, 30 μl le 30 μl bakeng sa lisampole tse 'ne ka tatellano. 3 μl ea eluate e ile ea laeloa moleng o mong le o mong.
MIII: TIANGEN Letšoao la III;
Electrophoresis e tsamaisitsoe ka 6 V / cm bakeng sa 30 min ho 1% agarose.
Liphetho: TIANGEN TRNzol Universal Reagent e ka ntša bohloeki bo phahameng le botšepehi bo botle ba RNA ho sebete sa rat, makhasi a raese, lisele tse tsoetseng pele le lisampole tsa tomoso, ka katleho e phahameng. Boleng ba RNA bo ka bapisoa le kapa bo phahame hanyane ho feta ba mofani oa lihlahisoa tsa L le T.
A-1 Cell lysis kapa homogenization ha ea lekana
- Fokotsa tšebeliso ea sampole, eketsa palo ea lysis buffer, eketsa homogenization le nako ea lysis.
Palo ea sampole ea A-2 e kholo haholo
- Fokotsa palo ea sampole e sebelisitsoeng kapa ho eketsa palo ea lysis buffer.
A-1 Lekala la lysis kapa homogenization e sa lekaneng
- Fokotsa tšebeliso ea sampole, eketsa palo ea lysis buffer, eketsa homogenization le nako ea lysis.
Palo ea sampole ea A-2 e kholo haholo
- Ka kopo sheba ho palo e kahodimodimo bokgoni sebetsa.
A-3 RNA ha e khetholloe ka botlalo ho tsoa kholomong
Kamora ho eketsa metsi a RNase-Free, e tlohele metsotso e 'maloa pele ho centrifuging.
A-4 Ethanol ka har'a marulelo
- Kamora ho hlatsoa, centrifuge hape ebe o tlosa sesepa sa ho hlatsoa ka hohle kamoo ho ka khonehang.
Setsi sa setso sa setso sa A-5 ha se tlosoe ka botlalo
- Ha o bokella lisele, ka kopo etsa bonnete ba hore o tlosa moetlo oa setso ka hohle kamoo ho ka khonehang.
A-6 Lisele tse bolokiloeng RNAstore ha li na centrifuged hantle
---- RNAstore segokanyipalo se seholo ho feta karolelano e tloaelehileng ea moetlo oa sele; kahoo matla a centrifugal a lokela ho eketsoa. Ho khothalletsoa ho centrifuge ho 3000x g.
A-7 Low RNA litaba le bongata ho sampuli
Sebelisa sampole e ntle ho tseba hore na chai e tlase e bakoa ke sampole.
A-1 Boitsebiso ha bo bocha
Lisele tse ncha li lokela ho bolokoa ka har'a naetrojene ea metsi hanghang kapa hanghang e kenngoe reagent ea RNAstore ho netefatsa phello ea ho ntša.
Palo ea sampole ea A-2 e kholo haholo
- Fokotsa palo ea sampole.
Tšilafalo ea A-3 RNasen
- Le ha buffer e fanoeng ka har'a kit e se na RNase, ho bonolo ho silafatsa RNase nakong ea ts'ebetso ea ho hula 'me e lokela ho sebetsoa ka hloko.
Tšilafalo ea A-4 Electrophoresis
- Kenya sebaka sa buffer ea electrophoresis 'me u netefatse hore lintho tse sebelisoang le Loading Buffer ha li na tšilafalo ea RNase.
A-5 Ho jarolla haholo bakeng sa electrophoresis
---- Fokotsa palo ea sampole play loading, ho play loading e mong le e hantle lokela ho sa feteng 2 μg.
A-1 Palo ea sampole e kholo haholo
- Fokotsa palo ea sampole.
A-2 Mehlala e meng e na le litaba tse ngata tsa DNA mme e ka alafshoa ka DNase.
- Etsa kalafo ea RNase-Free DNase ho tharollo ea RNA e fumanoeng, 'me RNA e ka sebelisoa ka kotloloho bakeng sa liteko tse latelang kamora kalafo, kapa e ka hloekisoa le ho feta ke lisebelisoa tsa RNA tsa tlhoekiso.
Bakeng sa likhalase tsa khalase, tse besitsoeng ho 150 ° C bakeng sa 4 h. Bakeng sa lisebelisoa tsa polasetiki, tse qoelitsoeng ka 0.5 M NaOH bakeng sa 10 min, ebe li hlatsoa ka botlalo ka metsi a se nang RNase ebe o hloekisa ho tlosa RNase ka botlalo. Li-reagents kapa tharollo e sebelisitsoeng tekong, haholo-holo metsi, ha ea lokela ho ba le RNase. Sebelisa metsi a se nang RNase bakeng sa litokisetso tsohle tsa reagent (eketsa metsi ka botlolo ea khalase e hloekileng, eketsa DEPC ho sekhahla sa ho qetela sa 0.1% (V / V), sisinya bosiu bo le bong le autoclave).
Ho tloha ha e theoa, fektheri ea rona e ntse e nts'etsapele lihlahisoa tsa maemo a pele ka ho latela molao-motheo
ea boleng pele. Lihlahisoa tsa rona li fumane botumo bo botle indastering ebile li na le boleng bo phahameng har'a bareki ba bacha le ba khale ..