2 × Taq Platinum PCR Motsoako
Ketsahalo Tlhaloso
1 unit (U) Taq Platinum DNA Polymerase activity e hlalosoa e le bongata ba enzyme e hlokahalang ho kenyelletsa 10 nmol deoxynucleotide ho lintho tse sa keneng ka asiti ho 74 ° C nakong ea 30 min ho sebelisoa semela sa semone sa salmon e le template / primer.
Boleng Control
Ho hloeka ka phumano ea SDS-LEQEPHE ho feta 99%; Ha ho ketsahalo ea nuclease e sa tloaelehang e fumanoeng; Phatsa ea kopi e le 'ngoe ho genome ea motho e ka holisoa ka nepo; Ha ho phetoho e kholo ea ts'ebetso ha e bolokoa ka mocheso oa kamore beke e le 'ngoe.
Main Technical di-parameter
E na le ts'ebetso ea tokollo ea 5'-3 "le ts'ebetso ea 3" -5 "ea tokollo, 'me botšepehi ba eona bo haufi le Pfu polymerase. Lebelo la katoloso ea Taq Platinum Polymerase le potlakile ho feta Pfu polymerase mme bokhoni ba ho matlafatsa bo phahame. Lihlahisoa tsa PCR li ka hokahanngoa ka kotloloho ho isa qetellong kapa li entsoe ka vector ea TA. Haeba ts'ebetso ea cloning e hloka ho ntlafatsoa, ho kgothaletswa ho hloekisa pele le ho eketsa li-overhang tsa 3'-dA pele li kopana le vector ea TA.
Teq Platinum MasterMix e le 'ngoe (Setifikeiti sa Naha sa Theknoloji e Phahameng)
■ Taq Platinum MasterMix e ntlafalitse ho khetheha le kutloisiso ea tšebetso ea PCR mme e ka matlafatsa litempele tse rarahaneng tse nang le litaba tse phahameng tsa GC, sebopeho sa bobeli le tse ling tse joalo. Ho ka ntlafatsoa ha ho na le likopi tse 2 tsa template e shebiloeng, ho netefatsa liphetho tse nepahetseng tsa liteko.
■ Moralo o ikhethileng oa Taq Platinum MasterMix o etsa hore sistimi eohle e arabele hantle, 'me ts'ebetso e ke ke ea angoa ke ho boloka leqhoa kapa polokelo ea nako e telele ho 4 ° C.
■ Tharollo e tsoakaneng le e sebetsang ea PCR e tsoakiloeng e ka etsa ts'ebetso hore e potlake hape e be bonolo, e fokotsa haholo matla a mosebetsi le phoso ea mehlala. Sesebelisoa sa PCR se ntlafatsang le se sebetsang hantle se kenyelelitsoe ho motsoako, o fokotsang litlhoko tsa maemo a PCR.
■ Sehlahisoa sena se na le litsamaiso tse nang le dae le tse se nang dae. Lihlahisoa tsa MasterMix tse nang le dae li ka khethoa ka kotloloho kamora PCR, ntle le ho eketsa sesebelisoa sa ho jarolla.
Likopo
E ka nka sebaka sa Pfu polymerase ho holisa lihlahisoa tse phahameng tsa bots'epehi ho tsoa litempeleng tse rarahaneng joalo ka li-genomes, 'me e loketse lits'ebetso tse kang ho kopanya liphatsa tsa lefutso, liphetoho tse ikhethileng saeteng le tlhahlobo ea nucleotide polymorphism (SNP), jj.
Litlhokomelo ho Rala li-Primers tsa PCR:
Bolelele ba khale ke hangata 20-25 mer. Leha ho le joalo, ha u etsa likaroloana tse telele tsa PCR, bolelele ba khale bo lokela ho eketsoa ho isa ho 30-35 mer.
■ Ha ho na liphahlo tse tlatselletsang lipakeng tsa litulo tse peli tsa mantlha, haholo bakeng sa metheo e meraro ea ho qetela qetellong ea 3 ′.
■ Likahare tsa GC li lokela ho ba 50-60%, 'me li qobe GC kapa AT e ruileng ea lehae. E le ho etsa hore li-primer le template li tlama hantle, qoba sebopeho sa AT qetellong ea 3 '.
■ Qoba selelekela ho theha sebopeho sa bobeli.
■ Khetha lipampiri tse peli tse nang le lithemparetjha tsa Tm haufinyane.
Palo ea boleng ba Tm ba li-Primers bakeng sa PCR:
■ Ha selelekela se ka tlase ho 20 mer: Tm = 2 ° C × (A + T) + 4 ° C × (G + C).
■ Ha selelekela se feta meraro e 20: Tm = 81.5 + 0.41 × (GC%) - 600 / L, moo L e leng bolelele ba selelekela.
■ Bea thempereichara e hokelang ho (Tm-5) ° C.
Keletso ea Primer ea PCR
Mefuta ea mantlha ea mantlha e ka khethoa lipakeng tsa 0.1 μM le 1.0 μM. Ho ba tlase haholo ha mohopolo oa pele ho lebisa ho lihlahisoa tse tlase tsa lihlahisoa tsa ntlafatso, ha mohopolo o phahameng haholo o tloaetse ho ntlafatsa haholo. Hangata, ha palo ea template ea DNA e le kholo kapa e le rarahaneng DNA ea template (joalo ka DNA ea motho ea lefutso) e sebelisoa e le template, mohopolo oa pele o lokela ho ba tlase. Ha palo ea template ea DNA e le nyane kapa template ea DNA e nyane (mohlala, plasmid DNA, jj.) E sebelisoa e le template, mohopolo oa pele o lokela ho ba holimo.
Lihlahisoa tsohle li ka fetoloa bakeng sa ODM / OEM. Bakeng sa lintlha,ka kopo tlanya Customized Service (ODM / OEM)
  |
Sebelisa genomic DNA joalo ka template ho holisa sekhechana sa 1 kb Kamora karabelo ea PCR, nka 5 μl bakeng sa tlhahlobo ea electrophoresis. |
Setšoantšo sa A-1
■ Template e na le litšila tsa protheine kapa li-inhibitors tsa Taq, jj. ——Tlhoekisa template ea DNA, tlosa litšila tsa protheine kapa u ntše template ea DNA ka lisebelisoa tsa tlhoekiso.
■ Tlatsetso ea template ha e felle ——Ho eketsa ka mokhoa o nepahetseng mocheso oa "denaturation" le ho lelefatsa nako ea denaturation.
■ Ho senyeha ha litempele ——Reka template hape.
Tlhahiso ea A-2
■ Boleng bo tlase ba li-primers ——Re kopanya hape selelekela.
■ Ho senyeha ha li-primer——Fana ka litlhahlobo tse phahameng tsa likhakanyo hore e be molumo o monyane bakeng sa ho li boloka. Qoba ho hatsela hangata le ho qhibiliha kapa nako e telele ea 4 ° C e bolokiloeng.
■ Moralo o sa nepahalang oa litlhahlobo (mohlala, bolelele ba lithuso ha boa lekana, botenya bo thehiloe lipakeng tsa lintho tsa pele, jj.
EA-3 Mg2+ho tsepamisa maikutlo
■ Mg2+ ho tsepamisa mohopolo ho tlase haholo ——Ho eketsa hantle Mg2+ mahloriso: Lokisetsa Mg2+ mahloriso ka letoto la likarabelo ho tloha ho 1 mM ho isa ho 3 mM ka karohano ea 0.5 mM ho fumana Mg2+ mahloriso bakeng sa template le primer ka 'ngoe.
Mocheso oa ho koala oa A-4
■ Mocheso o phahameng oa ho koala o ama tlamo ea selelekela le template. Fokotsa mocheso o kenang 'me u ntlafatse boemo ka gradient ea 2 ° C.
Nako ea katoloso ea A-5
■ Nako e khuts'oane ea katoloso —- Eketsa nako ea katoloso.
Phenomena: Mehlala e mebe e bonts'a lihlopha tsa tatellano.
Tšilafalo ea A-1 ea PCR
■ Tšilafalo ea sefapano ea tatellano ea sepheo kapa lihlahisoa tsa ntlafatso ——Tlhokomelo hore o se ke oa tšela sampole e nang le tatellano ea sepheo sa sampuli e fosahetseng kapa oa e tšolla ka har'a tube ea centrifuge. Li-reagents kapa lisebelisoa li lokela ho etsoa mochini o ikemetseng ho felisa li-acid tsa nucleic, mme boteng ba tšilafalo bo lokela ho khethoa ka liteko tse mpe tsa taolo.
■ Tšilafalo ea li-reagent ——Qobella li-reagents ebe u li boloka ka mocheso o tlase.
A-2 Tona-khōlōr
■ Mg2+ ho tsepamisa mohopolo ho tlase haholo ——Ho eketsa hantle Mg2+ mahloriso: Lokisetsa Mg2+ mahloriso ka letoto la likarabelo ho tloha ho 1 mM ho isa ho 3 mM ka karohano ea 0.5 mM ho fumana Mg2+ mahloriso bakeng sa template le primer ka 'ngoe.
■ Moralo oa semmuso o sa nepahalang, 'me tatellano ea sepheo e na le thuto ea bongoli le tatellano e sa amaneng le sepheo. ——Litlhahlobo tsa pele-pele.
Phenomena: Lihlopha tsa kholiso ea PCR ha li lumellane le boholo bo lebelletsoeng, ebang ke bo boholo kapa bo bonyenyane, kapa ka linako tse ling lihlopha tse ikhethileng tse matlafatsang le lihlopha tse sa ikhethileng tsa matlafatso lia etsahala.
Tlhahiso ea A-1
■ Lintlha tse qalang tsa semmuso
——Re-design ea khale.
■ Khakanyo ea semmuso e phahame haholo —— Ho eketsa mocheso oa denaturation hantle le ho lelefatsa nako ea denaturation.
Mofuta oa A-2 Mg2+ ho tsepamisa maikutlo
■ Mokha oa Mg2+ mahloriso a phahame haholo -— Fokotsa hantle mohopolo oa Mg2 +: Lokisetsa Mg2+ mahloriso ka letoto la likarabelo ho tloha ho 1 mM ho isa ho 3 mM ka karohano ea 0.5 mM ho fumana Mg2+ mahloriso bakeng sa template le primer ka 'ngoe.
A-3 Thermostable polymerase
■ Palo ea enzyme e fetelletseng —— Fokotsa palo ea enzyme ka nepo ka linako tse ling tsa 0.5 U.
Mocheso oa ho koala oa A-4
■ Mocheso o kenyang letsoho o tlase haholo —— Ho eketsa mocheso oa ho koala ka nepo kapa ho sebelisa mokhoa oa mekhahlelo e 'meli
Lipotoloho tsa A-5 PCR
■ Lipotoloho tse ngata tsa PCR ——Ho fokotsa palo ea lipotoloho tsa PCR.
Tlhahiso ea A-1—— Boemo bo ikgethang ba maemo a mabe— - Iketsetse meralo ea mantlha, fetola boemo le bolelele ba semmuso ho ntlafatsa botumo ba eona; kapa ho etsa sehlaha sa PCR.
DNA ea A-2
——Thempleite ha e ea hloeka— - Hloekisa template kapa u ntše DNA e nang le lisebelisoa tsa tlhoekiso.
EA-3 Mg2+ ho tsepamisa maikutlo
——Mahl2+ ho tsepamisa mohopolo ho phahame haholo -— Fokotsa hantle Mg2+ mahloriso: Lokisetsa Mg2+ mahloriso ka letoto la likarabelo ho tloha ho 1 mM ho isa ho 3 mM ka karohano ea 0.5 mM ho fumana Mg2+ mahloriso bakeng sa template le primer ka 'ngoe.
E-4 dNTP
——Khokahano ea li-dNTP li holimo haholo —— Fokotsa mohopolo oa dNTP ka nepo
Mocheso oa Annealing oa 5
——Thempereichara e tlaase e kenang ——Ho eketsa hantle mocheso o tlatsetsang
Lipotoloho tsa A-6
—Kenale palo ea potoloho
Mohato oa pele ke ho khetha polymerase e loketseng. Kamehla Taq polymerase e ke ke ea bala liphoso ka lebaka la ho haelloa ke ts'ebetso ea 3'-5 'ea tokollo,' me ho se tšoane hantle ho tla fokotsa ts'ebetso ea likhechana. Ka hona, Taq polymerase e tloaelehileng e ke ke ea holisa hantle likaroloana tsa sepheo tse kholo ho feta 5 kb. Taq polymerase e nang le phetoho e khethehileng kapa botšepehi bo phahameng ba polymerase e lokela ho khethoa ho ntlafatsa katleho le ho fihlela litlhoko tsa sehlotšoana se selelele. Ntle le moo, kholiso ea likhechana tse telele e boetse e hloka phetoho e tsamaellanang ea moralo oa khale, nako ea denaturation, nako ea katoloso, pH ea buffer, jj. Hangata, li-primers tse nang le 18-24 bp li ka lebisa ho chai e ngata. Bakeng sa ho thibela tšenyo ea template, nako ea denaturation ho 94 ° C e lokela ho fokotsoa ho isa ho 30 sec kapa ka tlase ho potoloho, mme nako ea ho nyoloha mocheso ho ea ho 94 ° C pele amplification e lokela ho ba tlase ho 1 min. Ho feta moo, ho beha mocheso oa katoloso ka 68 ° C le ho rala nako ea katoloso ho latela sekhahla sa 1 kb / min ho ka netefatsa kholiso e sebetsang ea likhechana tse telele.
Sekhahla sa phoso ea kholiso ea PCR se ka fokotsoa ka ho sebelisa li-polymerase tse fapaneng tsa DNA ka bots'epehi bo phahameng. Har'a li-polymerase tsohle tsa Taq DNA tse fumanehang ho fihlela joale, enzyme ea Pfu e na le sekhahla se tlase sa phoso le botšepehi bo phahameng ho fetisisa (bona tafole e hoketsoeng). Ntle le khetho ea enzyme, bafuputsi ba ka tsoela pele ho fokotsa sekhahla sa phetoho ea PCR ka ho ntlafatsa maemo a karabelo, ho kenyeletsoa le ho ntlafatsa sebopeho sa buffer, polasetiki ea thermostable polymerase le ho ntlafatsa palo ea potoloho ea PCR.
Likarolo tsa lihlahisoa
KE HOBANE'NG HA KHETHANG RONA
Ho tloha ha e theoa, fektheri ea rona e ntse e nts'etsapele lihlahisoa tsa maemo a pele ka ho latela molao-motheo
ea boleng pele. Lihlahisoa tsa rona li fumane botumo bo botle indastering ebile li na le boleng bo phahameng har'a bareki ba bacha le ba khale ..
- Mohala: +86 010-59822688
- Ho aha 5, No. 86, Shuangying West Road, Setereke sa Changping, Beijing.
- batho@tiangen.com
