2 × Taq PCR MasterMix Ⅱ

Lebelo le potlakileng la PCR le nang le ts'ebetso e phahameng le khatello e phahameng ea khatello ea maikutlo.

2 × Taq PCR MasterMix Ⅱ ke 2x PCR premix e sa tsoa ntlafatsoa le e ntlafalitsoeng e nang le likarolo tsohle tsa bohlokoa tsa karabelo ea PCR ntle le template ea DNA le li-primers.

Katse. Che	Paka Size
4993001	1ml
4993002	5x1ml
4992912	20x5x1 di ml
4992913	5 × 1ml
4992920	20 × 5 × 1ml
4992921	20 × 5 × 1ml

Romela ya imeile ho re

Product Qaqileng

Mohlala oa Teko

LBH

Lihlahisoa tsa Product

Likaroloana

■ Bokgoni bo phahameng ba matlafatso: Likhechana tsa DNA tsa boholo bo fapaneng (tse ka tlase ho 5 kb) le mehloli li ka ntlafatsoa ka nepo.
■ Kutloisiso e phahameng: Ho ka fihla ho 10 pg ea likhechana tsa liphofu tse ka eketsoang ho tsoa lipampiring tsa genomic.
■ Ho imeloa kelellong haholo: Bakeng sa litempele tse nang le litšila tse ngata joalo ka template e ntšitsoeng hampe / moetlo oa baktheria, sekhechana sa sepheo se ka ntlafatsoa habonolo. Mosebetsi oa polymerase o ke ke oa angoa ke ho hatsela khafetsa le ho qhibiliha.
■ E bonolo bakeng sa lits'ebetso: Sisteme ea karabelo e lokiselitsoe habonolo le ka potlako. Sekhechana se ntlafalitsoeng se na le 3 'end dA-overhang, e loketseng TA cloning.

Ga tlhaloso

Mofuta: Taq DNA polymerase
Sampole: Template e hloekisitsoeng / e ntšitsoeng ka thata / setso sa baktheria
Setšoantšo: > 10 maq
Boholo ba sekhechana: <5 kb
Likopo: Kholiso ea PCR ea likhechana tsa DNA, ho ngola mabitso ka DNA, katoloso ea khale, tatellano ea tatellano, phumano e kholo ea liphatsa tsa lefutso, liteko tsa PCR tse batlang li le ngata, ho fumana mohlala oa DNA, jj.

Lihlahisoa tsohle li ka fetoloa bakeng sa ODM / OEM. Bakeng sa lintlha,ka kopo tlanya Customized Service (ODM / OEM)

E fetileng: 2 × GC e ruileng PCR Remix

E 'ngoe: Sisteme ea Golden Easy PCR (e nang le dae)

Setšoantšo sa 1. Litempele tse tsoang mehloling e fapaneng li ntlafalitsoe ke TIANGEN Taq MasterMix II le Taq Mix e tloaelehileng e tsoang ho Supplier TR ka tatellano ho bona khatello ea khatello ea li-reagents. Liphetho li bonts'a hore lihlahisoa tsa TIANGEN li ka holisa likhechana tsa sepheo ho tsoa ho li-template tsa genomic le setso sa baktheria, mme khatello ea khatello ea maikutlo e betere ho feta ea Mofani oa thepa TR. K: template ea genomic e sa tsoakoang e ntšitsoeng ke TIANGEN TIANcombi DNA Lyse & Det PCR Kit. Prp / DN: Ho ntšoa ka mokhoa o litšila le ho sibolla lisampole tsa mali a motho. Raese: Ho ntšoa ka mokhoa o tala le ho sibolla lisampole tsa raese. B: Colony PCR. Sekhechana sa PCR ke 700 bp.
M: TIANGEN Lesupa III

Bokahohle bo botle bakeng sa li-template tse tsoang mehloling e fapaneng le ka bolelele bo fapaneng
Setšoantšo sa 2. Likhechana tsa mehloli le bolelele bo fapaneng li ile tsa holisoa ho sebelisoa TIANGEN Setso MasterMix II (A) le e tloaelehileng Setso Motsoako oa Morekisi TK (B), Mofani oa thepa TR (C), Mofani oa thepa V (D) le Mofani oa thepa G (E) ka ho latellana. Liphetho li bonts'a hore ts'ebetso e felletseng ea lihlahisoa tsa TIANGEN ke eona e ntle ka ho fetesisa mabapi le bokhoni ba ho holisa, ho khetheha le bokahohle.M: TIANGEN Marker III1: Soybean genomic DNA template (120 bp);

2-3: Rice genomic template ea DNA (694 bp, 2258 bp);

4: Setšoantšo sa Cotton genomic DNA (200 bp);

5: Escherichia coli template ea genomic DNA (2298 bp);

6-7: Mouse genome template (1 kb, 2 kb);

8-10: Rat genomic template ea DNA (1 kb, 2 kb, 2080 bp);

11-18: Setšoantšo sa DNA ea genome ea motho (300 bp, 448 bp (GC%: 74.8%), 1100 bp, 750 bp,

1000 bp, 1090 bp (GC%: 70.4%), 2 kb, 4 kb)

Ho ba le kutloisiso e phahameng
Setšoantšo sa 3. Mefuta e fapaneng ea likhoto le likhechana tsa DNA tsa motho li ile tsa ntlafatsoa ho sebelisoa TIANGEN Setso MasterMix II (A), e tloaelehileng Setso Motsoako oa Morekisi V (B) le Mofani oa thepa TK (C), ka ho latellana, ho bona kutloisiso ea kholo. Liphetho li bonts'a hore sehlahisoa sa TIANGEN se ka holisa sekhechana sa sepheo ho tsoa ho template ea genome ho isa tlase ho 0,01 ng, 'me kutlo ea sona e betere ho feta ea lihlahisoa tse tsoang ho Mofani oa V le TK.M: TIANGEN Marker III, N: NTCTemplate input 1-8 : 200 ng, 100 ng, 50 ng, 20 ng, 20 ng, 10 ng, 1 ng, 0.1 ng, 0.01 ng.

Q: Ha ho na lihlopha tsa matlafatso

Setšoantšo sa A-1

■ Template e na le litšila tsa protheine kapa li-inhibitors tsa Taq, jj. ——Tlhoekisa template ea DNA, tlosa litšila tsa protheine kapa u ntše template ea DNA ka lisebelisoa tsa tlhoekiso.

■ Tlatsetso ea template ha e felle ——Ho eketsa ka mokhoa o nepahetseng mocheso oa "denaturation" le ho lelefatsa nako ea denaturation.

■ Ho senyeha ha litempele ——Reka template hape.

Tlhahiso ea A-2

■ Boleng bo tlase ba li-primers ——Re kopanya hape selelekela.

■ Ho senyeha ha li-primer——Fana ka litlhahlobo tse phahameng tsa likhakanyo hore e be molumo o monyane bakeng sa ho li boloka. Qoba ho hatsela hangata le ho qhibiliha kapa nako e telele ea 4 ° C e bolokiloeng.

■ Moralo o sa nepahalang oa litlhahlobo (mohlala, bolelele ba lithuso ha boa lekana, botenya bo thehiloe lipakeng tsa lintho tsa pele, jj.

EA-3 Mg²⁺ho tsepamisa maikutlo

■ Mg²⁺ ho tsepamisa mohopolo ho tlase haholo ——Ho eketsa hantle Mg²⁺mahloriso: Lokisetsa Mg²⁺ mahloriso ka letoto la likarabelo ho tloha ho 1 mM ho isa ho 3 mM ka karohano ea 0.5 mM ho fumana Mg²⁺ mahloriso bakeng sa template le primer ka 'ngoe.

Mocheso oa ho koala oa A-4

■ Mocheso o phahameng oa ho koala o ama tlamo ea selelekela le template. Fokotsa mocheso o kenang 'me u ntlafatse boemo ka gradient ea 2 ° C.

Nako ea katoloso ea A-5

■ Nako e khuts'oane ea katoloso —- Eketsa nako ea katoloso.

P: Ho ba le tšoaetso ea bohata

Phenomena: Mehlala e mebe e bonts'a lihlopha tsa tatellano.

Tšilafalo ea A-1 ea PCR

■ Tšilafalo ea sefapano ea tatellano ea sepheo kapa lihlahisoa tsa ntlafatso ——Tlhokomelo hore o se ke oa tšela sampole e nang le tatellano ea sepheo sa sampuli e fosahetseng kapa oa e tšolla ka har'a tube ea centrifuge. Li-reagents kapa lisebelisoa li lokela ho etsoa mochini o ikemetseng ho felisa li-acid tsa nucleic, mme boteng ba tšilafalo bo lokela ho khethoa ka liteko tse mpe tsa taolo.

■ Tšilafalo ea li-reagent ——Qobella li-reagents ebe u li boloka ka mocheso o tlase.

A-2 Tona-khōlōr

■ Mg²⁺ ho tsepamisa mohopolo ho tlase haholo ——Ho eketsa hantle Mg²⁺ mahloriso: Lokisetsa Mg²⁺ mahloriso ka letoto la likarabelo ho tloha ho 1 mM ho isa ho 3 mM ka karohano ea 0.5 mM ho fumana Mg²⁺ mahloriso bakeng sa template le primer ka 'ngoe.

■ Moralo oa semmuso o sa nepahalang, 'me tatellano ea sepheo e na le thuto ea bongoli le tatellano e sa amaneng le sepheo. ——Litlhahlobo tsa pele-pele.

Q: Kholiso e sa tobang

Phenomena: Lihlopha tsa kholiso ea PCR ha li lumellane le boholo bo lebelletsoeng, ebang ke bo boholo kapa bo bonyenyane, kapa ka linako tse ling lihlopha tse ikhethileng tse matlafatsang le lihlopha tse sa ikhethileng tsa matlafatso lia etsahala.

Tlhahiso ea A-1

■ Lintlha tse qalang tsa semmuso

——Re-design ea khale.

■ Khakanyo ea semmuso e phahame haholo —— Ho eketsa mocheso oa denaturation hantle le ho lelefatsa nako ea denaturation.

Mofuta oa A-2 Mg²⁺ ho tsepamisa maikutlo

■ Mokha oa Mg²⁺ mahloriso a phahame haholo -— Fokotsa hantle mohopolo oa Mg2 +: Lokisetsa Mg²⁺ mahloriso ka letoto la likarabelo ho tloha ho 1 mM ho isa ho 3 mM ka karohano ea 0.5 mM ho fumana Mg²⁺ mahloriso bakeng sa template le primer ka 'ngoe.

A-3 Thermostable polymerase

■ Palo ea enzyme e fetelletseng —— Fokotsa palo ea enzyme ka nepo ka linako tse ling tsa 0.5 U.

Mocheso oa ho koala oa A-4

■ Mocheso o kenyang letsoho o tlase haholo —— Ho eketsa mocheso oa ho koala ka nepo kapa ho sebelisa mokhoa oa mekhahlelo e 'meli

Lipotoloho tsa A-5 PCR

■ Lipotoloho tse ngata tsa PCR ——Ho fokotsa palo ea lipotoloho tsa PCR.

P: Lihlopha tse hlabang kapa tse tlotsang

Tlhahiso ea A-1—— Boemo bo ikgethang ba maemo a mabe— - Iketsetse meralo ea mantlha, fetola boemo le bolelele ba semmuso ho ntlafatsa botumo ba eona; kapa ho etsa sehlaha sa PCR.

DNA ea A-2

——Thempleite ha e ea hloeka— - Hloekisa template kapa u ntše DNA e nang le lisebelisoa tsa tlhoekiso.

EA-3 Mg²⁺ ho tsepamisa maikutlo

——Mahl²⁺ ho tsepamisa mohopolo ho phahame haholo -— Fokotsa hantle Mg²⁺ mahloriso: Lokisetsa Mg²⁺ mahloriso ka letoto la likarabelo ho tloha ho 1 mM ho isa ho 3 mM ka karohano ea 0.5 mM ho fumana Mg²⁺ mahloriso bakeng sa template le primer ka 'ngoe.

E-4 dNTP

——Khokahano ea li-dNTP li holimo haholo —— Fokotsa mohopolo oa dNTP ka nepo

Mocheso oa Annealing oa 5

——Thempereichara e tlaase e kenang ——Ho eketsa hantle mocheso o tlatsetsang

Lipotoloho tsa A-6

—Kenale palo ea potoloho

P: Ke template ea bokae ea DNA e lokelang ho kenyelletsoa ho 50 μl PCR reaction system?

P: U ka holisa likaroloana tse telele joang?

Mohato oa pele ke ho khetha polymerase e loketseng. Kamehla Taq polymerase e ke ke ea bala liphoso ka lebaka la ho haelloa ke ts'ebetso ea 3'-5 'ea tokollo,' me ho se tšoane hantle ho tla fokotsa ts'ebetso ea likhechana. Ka hona, Taq polymerase e tloaelehileng e ke ke ea holisa hantle likaroloana tsa sepheo tse kholo ho feta 5 kb. Taq polymerase e nang le phetoho e khethehileng kapa botšepehi bo phahameng ba polymerase e lokela ho khethoa ho ntlafatsa katleho le ho fihlela litlhoko tsa sehlotšoana se selelele. Ntle le moo, kholiso ea likhechana tse telele e boetse e hloka phetoho e tsamaellanang ea moralo oa khale, nako ea denaturation, nako ea katoloso, pH ea buffer, jj. Hangata, li-primers tse nang le 18-24 bp li ka lebisa ho chai e ngata. Bakeng sa ho thibela tšenyo ea template, nako ea denaturation ho 94 ° C e lokela ho fokotsoa ho isa ho 30 sec kapa ka tlase ho potoloho, mme nako ea ho nyoloha mocheso ho ea ho 94 ° C pele amplification e lokela ho ba tlase ho 1 min. Ho feta moo, ho beha mocheso oa katoloso ka 68 ° C le ho rala nako ea katoloso ho latela sekhahla sa 1 kb / min ho ka netefatsa kholiso e sebetsang ea likhechana tse telele.

Q: U ka ntlafatsa ts'epahalo ea kholiso ea PCR joang?

Sekhahla sa phoso ea kholiso ea PCR se ka fokotsoa ka ho sebelisa li-polymerase tse fapaneng tsa DNA ka bots'epehi bo phahameng. Har'a li-polymerase tsohle tsa Taq DNA tse fumanehang ho fihlela joale, enzyme ea Pfu e na le sekhahla se tlase sa phoso le botšepehi bo phahameng ho fetisisa (bona tafole e hoketsoeng). Ntle le khetho ea enzyme, bafuputsi ba ka tsoela pele ho fokotsa sekhahla sa phetoho ea PCR ka ho ntlafatsa maemo a karabelo, ho kenyeletsoa le ho ntlafatsa sebopeho sa buffer, polasetiki ea thermostable polymerase le ho ntlafatsa palo ea potoloho ea PCR.

Ngola molaetsa oa hau mona ebe u o romella ho rona