2 × Pfu PCR Motsoako

Botšepehi bo phahameng bo se nang sekoli Taq DNA polymerase.

Pfu DNA Polymerase e hlahisoa ho tsoa ho E. coli ka liphatsa tsa lefutso tsa Pyrococus Furiosis DNA Polymerase mme ea hloekisoa mme ea arohanngoa ke tlhoekiso e ngata ea kholomo. Hobane Pfu e na le ts'ebetso ea tokollo ea 3'-5 ', e ka hlahloba ts'ebetso ea ntlafatso ea DNA, ha moetlo oa Taq DNA Polymerase o sa khone. Le ha li-polymerase tse ling tsa Taq DNA tse kang Vent, Deep Vent, Tli, UITma, jj li na le ts'ebetso ea ho bala liphoso, Pfu e na le sekhahla se tlase ka ho fetesisa har'a li-polymerase tsohle tsa Taq DNA tse fumanehang ho fihlela joale. Pfu DNA Polymerase e na le botsitso bo botle ho feta Taq DNA polymerase e tloaelehileng, 'me e ka boloka ts'ebetso e fetang 90% ho 95 ° C hora e le' ngoe.

Motsoako o le mong oa Pfu PCR Mix (Setifikeiti sa Naha sa Theknoloji e Phahameng)

■ Pfu PCR Mix e ntlafalitse boits'oaro le kutloisiso ea tšebetso ea PCR mme e ka matlafatsa litempele tse rarahaneng tse nang le litaba tse phahameng tsa GC, sebopeho sa bobeli le tse ling tse joalo. Ho ka ntlafatsoa ha ho na le likopi tse 2 tsa template e shebiloeng, ho netefatsa liphetho tse nepahetseng tsa liteko.

■ Morero o ikhethileng oa Pfu MasterMix o etsa hore sistimi eohle ea karabelo e tsitse, mme ts'ebetso e ke ke ea angoa ke ho qhoqhoa khafetsa kapa polokelo ea nako e telele ho 4 ° C.

■ Tharollo e tsitsitseng le e sebetsang e lokiselitsoeng pele ea PCR Remix e ka etsa ts'ebetso hore e potlake hape e be bonolo, e fokotsa haholo matla a mosebetsi le phoso ea mehlala. Sesebelisoa sa PCR se ntlafatsang le se sebetsang hantle se kenyelelitsoe ho motsoako, o fokotsang litlhoko tsa maemo a PCR.

■ Sehlahisoa sena se na le litsamaiso tse nang le dae le tse se nang dae. Lihlahisoa tse nang le PCR Mix tse nang le dae li ka khethoa ka kotloloho kamora PCR, ntle le ho eketsa sesupa-hloko.

Katse. Che	Paka Size
4992780	1ml
4992781	5 * 1ml
4992782	1ml
4992906	5 * 1ml

Romela ya imeile ho re

Product Qaqileng

Phallo ea mosebetsi

LBH

Lihlahisoa tsa Product

Ketsahalo Tlhaloso

Ts'ebetso ea yuniti e le 1 (U) Pfu DNA Polymerase e hlalosoa e le bongata ba enzyme e hlokahalang ho kenyelletsa 10 nmol deoxynucleotide ho lintho tse sa keneng ka asiti ho 74 ° C nakong ea metsotso e 30 ho sebelisoa semela sa semone sa salmon e le template / primer.

Boleng Control

Ho hloeka ka phumano ea SDS-LEQEPHE ho feta 99%; Ha ho ketsahalo ea nuclease e sa tloaelehang e fumanoeng; Phatsa ea kopi e le 'ngoe ho genome ea motho e ka holisoa ka nepo; Ha ho phetoho e kholo ea ts'ebetso ha e bolokoa ka mocheso oa kamore beke e le 'ngoe.

Main Technical di-parameter

E na le ts'ebetso ea tokollo ea 3'-5 'mme ha e na ts'ebetso ea 5-6. Lebelo la katoloso ea matlafatso ea DNA le tlase ho feta la Taq polymerase, mme ka kakaretso lebelo la katoloso ea enzyme ea Pfu ke 0.5-1 kb ka motsotso. Botsitso ba mocheso ba Pfu bo betere ho feta Taq. Bakeng sa litempele tse nang le lintlha tse phahameng tsa GC, mocheso oa denaturation o ka eketsoa ho 98 ° C, o se nang phello ketsahalong ea Pfu polymerase. Sehlahisoa sa PCR se felile, se ka kenyelletsoang ka li-overhang tsa 3'-dA pele se khanneloa ka vekara ea TA kapa se entsoe ka vector e sa hlabang

Likopo

E ka sebelisoa bakeng sa kholo e phahameng ea bots'epehi ea DNA, joalo ka ponahalo ea liphatsa tsa lefutso, phetoho e etselitsoeng sebaka, tlhahlobo ea single ea nucleotide polymorphism (SNP) le ho lokisa.

Lihlahisoa tsohle li ka fetoloa bakeng sa ODM / OEM. Bakeng sa lintlha,ka kopo tlanya Customized Service (ODM / OEM)

E fetileng: Setsi sa Mutagenesis Kit se Potlakileng

E 'ngoe: Ultra HiFidelity PCR Kit

Sebelisa genomic DNA joalo ka template ho holisa sekhechana sa 1kb.
Kamora ts'ebetso ea PCR, nka 5 μl bakeng sa tlhahlobo ea electrophoresis.

Q: Ha ho na lihlopha tsa matlafatso

Setšoantšo sa A-1

■ Template e na le litšila tsa protheine kapa li-inhibitors tsa Taq, jj. ——Tlhoekisa template ea DNA, tlosa litšila tsa protheine kapa u ntše template ea DNA ka lisebelisoa tsa tlhoekiso.

■ Tlatsetso ea template ha e felle ——Ho eketsa ka mokhoa o nepahetseng mocheso oa "denaturation" le ho lelefatsa nako ea denaturation.

■ Ho senyeha ha litempele ——Reka template hape.

Tlhahiso ea A-2

■ Boleng bo tlase ba li-primers ——Re kopanya hape selelekela.

■ Ho senyeha ha li-primer——Fana ka litlhahlobo tse phahameng tsa likhakanyo hore e be molumo o monyane bakeng sa ho li boloka. Qoba ho hatsela hangata le ho qhibiliha kapa nako e telele ea 4 ° C e bolokiloeng.

■ Moralo o sa nepahalang oa litlhahlobo (mohlala, bolelele ba lithuso ha boa lekana, botenya bo thehiloe lipakeng tsa lintho tsa pele, jj.

EA-3 Mg²⁺ho tsepamisa maikutlo

■ Mg²⁺ ho tsepamisa mohopolo ho tlase haholo ——Ho eketsa hantle Mg²⁺mahloriso: Lokisetsa Mg²⁺ mahloriso ka letoto la likarabelo ho tloha ho 1 mM ho isa ho 3 mM ka karohano ea 0.5 mM ho fumana Mg²⁺ mahloriso bakeng sa template le primer ka 'ngoe.

Mocheso oa ho koala oa A-4

■ Mocheso o phahameng oa ho koala o ama tlamo ea selelekela le template. Fokotsa mocheso o kenang 'me u ntlafatse boemo ka gradient ea 2 ° C.

Nako ea katoloso ea A-5

■ Nako e khuts'oane ea katoloso —- Eketsa nako ea katoloso.

P: Ho ba le tšoaetso ea bohata

Phenomena: Mehlala e mebe e bonts'a lihlopha tsa tatellano.

Tšilafalo ea A-1 ea PCR

■ Tšilafalo ea sefapano ea tatellano ea sepheo kapa lihlahisoa tsa ntlafatso ——Tlhokomelo hore o se ke oa tšela sampole e nang le tatellano ea sepheo sa sampuli e fosahetseng kapa oa e tšolla ka har'a tube ea centrifuge. Li-reagents kapa lisebelisoa li lokela ho etsoa mochini o ikemetseng ho felisa li-acid tsa nucleic, mme boteng ba tšilafalo bo lokela ho khethoa ka liteko tse mpe tsa taolo.

■ Tšilafalo ea li-reagent ——Qobella li-reagents ebe u li boloka ka mocheso o tlase.

A-2 Tona-khōlōr

■ Mg²⁺ ho tsepamisa mohopolo ho tlase haholo ——Ho eketsa hantle Mg²⁺ mahloriso: Lokisetsa Mg²⁺ mahloriso ka letoto la likarabelo ho tloha ho 1 mM ho isa ho 3 mM ka karohano ea 0.5 mM ho fumana Mg²⁺ mahloriso bakeng sa template le primer ka 'ngoe.

■ Moralo oa semmuso o sa nepahalang, 'me tatellano ea sepheo e na le thuto ea bongoli le tatellano e sa amaneng le sepheo. ——Litlhahlobo tsa pele-pele.

Q: Kholiso e sa tobang

Phenomena: Lihlopha tsa kholiso ea PCR ha li lumellane le boholo bo lebelletsoeng, ebang ke bo boholo kapa bo bonyenyane, kapa ka linako tse ling lihlopha tse ikhethileng tse matlafatsang le lihlopha tse sa ikhethileng tsa matlafatso lia etsahala.

Tlhahiso ea A-1

■ Lintlha tse qalang tsa semmuso

——Re-design ea khale.

■ Khakanyo ea semmuso e phahame haholo —— Ho eketsa mocheso oa denaturation hantle le ho lelefatsa nako ea denaturation.

Mofuta oa A-2 Mg²⁺ ho tsepamisa maikutlo

■ Mokha oa Mg²⁺ mahloriso a phahame haholo -— Fokotsa hantle mohopolo oa Mg2 +: Lokisetsa Mg²⁺ mahloriso ka letoto la likarabelo ho tloha ho 1 mM ho isa ho 3 mM ka karohano ea 0.5 mM ho fumana Mg²⁺ mahloriso bakeng sa template le primer ka 'ngoe.

A-3 Thermostable polymerase

■ Palo ea enzyme e fetelletseng —— Fokotsa palo ea enzyme ka nepo ka linako tse ling tsa 0.5 U.

Mocheso oa ho koala oa A-4

■ Mocheso o kenyang letsoho o tlase haholo —— Ho eketsa mocheso oa ho koala ka nepo kapa ho sebelisa mokhoa oa mekhahlelo e 'meli

Lipotoloho tsa A-5 PCR

■ Lipotoloho tse ngata tsa PCR ——Ho fokotsa palo ea lipotoloho tsa PCR.

P: Lihlopha tse hlabang kapa tse tlotsang

Tlhahiso ea A-1—— Boemo bo ikgethang ba maemo a mabe— - Iketsetse meralo ea mantlha, fetola boemo le bolelele ba semmuso ho ntlafatsa botumo ba eona; kapa ho etsa sehlaha sa PCR.

DNA ea A-2

——Thempleite ha e ea hloeka— - Hloekisa template kapa u ntše DNA e nang le lisebelisoa tsa tlhoekiso.

EA-3 Mg²⁺ ho tsepamisa maikutlo

——Mahl²⁺ ho tsepamisa mohopolo ho phahame haholo -— Fokotsa hantle Mg²⁺ mahloriso: Lokisetsa Mg²⁺ mahloriso ka letoto la likarabelo ho tloha ho 1 mM ho isa ho 3 mM ka karohano ea 0.5 mM ho fumana Mg²⁺ mahloriso bakeng sa template le primer ka 'ngoe.

E-4 dNTP

——Khokahano ea li-dNTP li holimo haholo —— Fokotsa mohopolo oa dNTP ka nepo

Mocheso oa Annealing oa 5

——Thempereichara e tlaase e kenang ——Ho eketsa hantle mocheso o tlatsetsang

Lipotoloho tsa A-6

—Kenale palo ea potoloho

P: Ke template ea bokae ea DNA e lokelang ho kenyelletsoa ho 50 μl PCR reaction system?

P: U ka holisa likaroloana tse telele joang?

Mohato oa pele ke ho khetha polymerase e loketseng. Kamehla Taq polymerase e ke ke ea bala liphoso ka lebaka la ho haelloa ke ts'ebetso ea 3'-5 'ea tokollo,' me ho se tšoane hantle ho tla fokotsa ts'ebetso ea likhechana. Ka hona, Taq polymerase e tloaelehileng e ke ke ea holisa hantle likaroloana tsa sepheo tse kholo ho feta 5 kb. Taq polymerase e nang le phetoho e khethehileng kapa botšepehi bo phahameng ba polymerase e lokela ho khethoa ho ntlafatsa katleho le ho fihlela litlhoko tsa sehlotšoana se selelele. Ntle le moo, kholiso ea likhechana tse telele e boetse e hloka phetoho e tsamaellanang ea moralo oa khale, nako ea denaturation, nako ea katoloso, pH ea buffer, jj. Hangata, li-primers tse nang le 18-24 bp li ka lebisa ho chai e ngata. Bakeng sa ho thibela tšenyo ea template, nako ea denaturation ho 94 ° C e lokela ho fokotsoa ho isa ho 30 sec kapa ka tlase ho potoloho, mme nako ea ho nyoloha mocheso ho ea ho 94 ° C pele amplification e lokela ho ba tlase ho 1 min. Ho feta moo, ho beha mocheso oa katoloso ka 68 ° C le ho rala nako ea katoloso ho latela sekhahla sa 1 kb / min ho ka netefatsa kholiso e sebetsang ea likhechana tse telele.

Q: U ka ntlafatsa ts'epahalo ea kholiso ea PCR joang?

Sekhahla sa phoso ea kholiso ea PCR se ka fokotsoa ka ho sebelisa li-polymerase tse fapaneng tsa DNA ka bots'epehi bo phahameng. Har'a li-polymerase tsohle tsa Taq DNA tse fumanehang ho fihlela joale, enzyme ea Pfu e na le sekhahla se tlase sa phoso le botšepehi bo phahameng ho fetisisa (bona tafole e hoketsoeng). Ntle le khetho ea enzyme, bafuputsi ba ka tsoela pele ho fokotsa sekhahla sa phetoho ea PCR ka ho ntlafatsa maemo a karabelo, ho kenyeletsoa le ho ntlafatsa sebopeho sa buffer, polasetiki ea thermostable polymerase le ho ntlafatsa palo ea potoloho ea PCR.

Ngola molaetsa oa hau mona ebe u o romella ho rona