■ Lithutsoana tse ntlafalitsoeng bakeng sa lisele tse tsoetseng pele le disampole tsa baktheria li etsa hore ts'ebetso e be bonolo le e bonolo.
■ DNase I e ikhethileng e fokotsa tšoaetso ea genomic DNA.
■ Li-Columns tsa RNase-Free Filtration CS li tlosa litšila tse ling.
■ RNA e hloekileng le e ikemiselitseng ho sebelisoa e loketse lits'ebetso tse bonolo tsa noka.
■ Ha ho ntšoe phenol / chloroform, ha ho na pula ea LiCl le ethanol, ha ho hlokahale CsCl gradient centrifugation, e etsang hore ts'ebetso e bolokehe hape e tšepahale.
■ RT-PCR.
■ Northern Blot, Dot Blot.
■ PCR ea Nako ea Sebele.
■ Tlhatlhobo ea Chip.
■ PolyA Screening, in vitro, tlhahlobo ea ts'ireletso ea RNase le khomphutha ea limolek'hule.
Lihlahisoa tsohle li ka fetoloa bakeng sa ODM / OEM. Bakeng sa lintlha,ka kopo tlanya Customized Service (ODM / OEM)
Boitsebiso: Lisele tsa Jurkat tsa Batho (1 × 106 ) Mokhoa: RNA e felletseng ea Lisele tsa Batho tsa Jukat e ile ea aroloa ho sebelisoa RNAprep Pure Cell / Bacteria Kit. Liphetho: Ka kopo bona setšoantšo se kaholimo sa agarose gel electrophoresis. 2-4 μl ea 50 μl eluates e ile ea laeloa moleng o mong le o mong. Electrophoresis e tsamaisitsoe ka 6 V / cm bakeng sa 30 min ho 1% agelose gel. |
|
Lintho tse bonahalang: TOP10 E.coli (1 × 108) Mokhoa: RNA eohle ea TOP10 E. coli e ne e arotsoe ka thoko ho sebelisa RNAprep Pure Cell / Bacteria Kit. Liphetho: Ka kopo bona setšoantšo se kaholimo sa agarose gel electrophoresis. 2-4 μl ea 50 μl eluates e ile ea laeloa moleng o mong le o mong. Electrophoresis e tsamaisitsoe ka 6 V / cm bakeng sa 30 min ho 1% agelose gel. |
A-1 Cell lysis kapa homogenization ha ea lekana
- Fokotsa tšebeliso ea sampole, eketsa palo ea lysis buffer, eketsa homogenization le nako ea lysis.
Palo ea sampole ea A-2 e kholo haholo
- Fokotsa palo ea sampole e sebelisitsoeng kapa ho eketsa palo ea lysis buffer.
A-1 Lekala la lysis kapa homogenization e sa lekaneng
- Fokotsa tšebeliso ea sampole, eketsa palo ea lysis buffer, eketsa homogenization le nako ea lysis.
Palo ea sampole ea A-2 e kholo haholo
- Ka kopo sheba ho palo e kahodimodimo bokgoni sebetsa.
A-3 RNA ha e khetholloe ka botlalo ho tsoa kholomong
Kamora ho eketsa metsi a RNase-Free, e tlohele metsotso e 'maloa pele ho centrifuging.
A-4 Ethanol ka har'a marulelo
- Kamora ho hlatsoa, centrifuge hape ebe o tlosa sesepa sa ho hlatsoa ka hohle kamoo ho ka khonehang.
Setsi sa setso sa setso sa A-5 ha se tlosoe ka botlalo
- Ha o bokella lisele, ka kopo etsa bonnete ba hore o tlosa moetlo oa setso ka hohle kamoo ho ka khonehang.
A-6 Lisele tse bolokiloeng RNAstore ha li na centrifuged hantle
---- RNAstore segokanyipalo se seholo ho feta karolelano e tloaelehileng ea moetlo oa sele; kahoo matla a centrifugal a lokela ho eketsoa. Ho khothalletsoa ho centrifuge ho 3000x g.
A-7 Low RNA litaba le bongata ho sampuli
Sebelisa sampole e ntle ho tseba hore na chai e tlase e bakoa ke sampole.
A-1 Boitsebiso ha bo bocha
Lisele tse ncha li lokela ho bolokoa ka har'a naetrojene ea metsi hanghang kapa hanghang e kenngoe reagent ea RNAstore ho netefatsa phello ea ho ntša.
Palo ea sampole ea A-2 e kholo haholo
- Fokotsa palo ea sampole.
Tšilafalo ea A-3 RNasen
- Le ha buffer e fanoeng ka har'a kit e se na RNase, ho bonolo ho silafatsa RNase nakong ea ts'ebetso ea ho hula 'me e lokela ho sebetsoa ka hloko.
Tšilafalo ea A-4 Electrophoresis
- Kenya sebaka sa buffer ea electrophoresis 'me u netefatse hore lintho tse sebelisoang le Loading Buffer ha li na tšilafalo ea RNase.
A-5 Ho jarolla haholo bakeng sa electrophoresis
---- Fokotsa palo ea sampole play loading, ho play loading e mong le e hantle lokela ho sa feteng 2 μg.
A-1 Palo ea sampole e kholo haholo
- Fokotsa palo ea sampole.
A-2 Mehlala e meng e na le litaba tse ngata tsa DNA mme e ka alafshoa ka DNase.
- Etsa kalafo ea RNase-Free DNase ho tharollo ea RNA e fumanoeng, 'me RNA e ka sebelisoa ka kotloloho bakeng sa liteko tse latelang kamora kalafo, kapa e ka hloekisoa le ho feta ke lisebelisoa tsa RNA tsa tlhoekiso.
Bakeng sa likhalase tsa khalase, tse besitsoeng ho 150 ° C bakeng sa 4 h. Bakeng sa lisebelisoa tsa polasetiki, tse qoelitsoeng ka 0.5 M NaOH bakeng sa 10 min, ebe li hlatsoa ka botlalo ka metsi a se nang RNase ebe o hloekisa ho tlosa RNase ka botlalo. Li-reagents kapa tharollo e sebelisitsoeng tekong, haholo-holo metsi, ha ea lokela ho ba le RNase. Sebelisa metsi a se nang RNase bakeng sa litokisetso tsohle tsa reagent (eketsa metsi ka botlolo ea khalase e hloekileng, eketsa DEPC ho sekhahla sa ho qetela sa 0.1% (V / V), sisinya bosiu bo le bong le autoclave).
Ho tloha ha e theoa, fektheri ea rona e ntse e nts'etsapele lihlahisoa tsa maemo a pele ka ho latela molao-motheo
ea boleng pele. Lihlahisoa tsa rona li fumane botumo bo botle indastering ebile li na le boleng bo phahameng har'a bareki ba bacha le ba khale ..