K'hemik'hale ea lijalo tsa GMO le Kit ea Amplification

Haholo-holo e loketse tlhahiso ea lijalo tsa GMO le phumano ea transgenic ea PCR.

Setsi sa GMO Crop Extraction & Amplification Kit se thehiloe ka kotloloho bakeng sa phumano ea PCR ea lijalo tsa GMO. Sesebelisoa se ikhethileng sa lysis se fumanehang Karolong ea A ea kit se ka qhekella ka ho khetheha lisele tsa lijalo tse kholo — koro, poone, raese, k'hothone le soya, ho hlahisa likarolo tse amanang le tsona tse kang li-acid tsa nucleic le liprotheine. Phallo ea phenol / chloroform e kopantsoeng le RNase e khethehileng e ka hloekisa DNA e hloekileng e se nang litšila tse kang RNA, protheine le li-ion tsa tšepe. DNA e hloekisitsoeng e ka sebelisoa ts'ebetsong e latelang ea PCR. Karolo ea B ea lisebelisoa ke likarolo tse peli tse bonolo tsa PCR reaction system tse nang le 2 × GMO PCR Buffer le GMO DNA Polymerase. GMO DNA Polymerase ke polymerase e phekolehang e fetotsoeng ka lithibela-mafu. 2 × GMO PCR Buffer e na le likarolo tse fapaneng tse kang MgCl₂, dNTPs, PCR reaction stabilizer, optimizer le enhancer nakong ea 2 × GMO. E na le melemo ea ts'ebetso e potlakileng le e bonolo, kutloisiso e phahameng, khethollo e matla, botsitso bo botle, jj E ka sebelisoa hammoho le Karolo ea A bakeng sa tlhahlobo ea PCR ea lijalo tsa GMO.

Katse. Che	Paka Size
4992905	200 rxn

Romela ya imeile ho re

Product Qaqileng

Mohlala oa Teko

LBH

Lihlahisoa tsa Product

Likaroloana

■ Ts'ebetso e pharalletseng: Setsi sena se ka ntša DNA ea boleng bo holimo lijalong tse hlano tse kholo tsa GMO.
■ E bonolo ebile e potlakile: Ho ntša DNA ea lijalo tsa GMO ho ka phetheloa ka nako ea lihora tse peli. Ha ho na tlhoko ea li-centrifuge tse kholo tsa sehatsetsi, litlhoko tse tlase tsa lisebelisoa le lisebelisoa. E loketse ts'oaetso e potlakileng ea genomic ea lijalo tsa GMO maemong ohle a litsi tsa lipatlisiso.
■ Ts'ebetso e phahameng le lintlha tse ikhethileng: Sesebelisoa se ikhethileng sa Taq polymerase ea anti-anti-anti-anti-anti-proof se tiisa ho phahamisa polymerase hantle, e ikhethang ho feta Taq polymerase e tloaelehileng.

Likopo

Setsi sena se ka ntša DNA ea boleng bo holimo lijalong tse kholo tsa GMO tse kang koro, poone, raese, k'hothone le soya, mme sa etsa phumano ea PCR ea lijalo tsa GMO.

Lihlahisoa tsohle li ka fetoloa bakeng sa ODM / OEM. Bakeng sa lintlha,ka kopo tlanya Customized Service (ODM / OEM)

E fetileng: FastKing Mohato o le Mong RT-qPCR Kit (Probe)

E 'ngoe: TIANcombi DNA Lyse & Det PCR Kit

	Tlhaloso ea Genomic DNA Ho ntšoa ha Genomic DNA ho entsoe ka makhasi a 100 mg a raese, poone, soya, k'hothone le koro ka ho latellana. Teko e phetiloe habeli. 3 μl DNA ho tsoa palong eohle ea 100 μl eluents e ile ea laeloa moleng o mong le o mong. Khakanyo ea gel ea agarose e ne e le 2%. Electrophoresis e ne e etsoa tlasa 6 V / cm bakeng sa 20 min. D15000: TIANGEN D15000 Lesupa la DNA.
	Tlhahlobo ea PCR Genomic DNA ea raese, poone, soya, k'hothone le koro li ile tsa holisoa ka ho latellana. Teko e phetiloe habeli. 6 μl ho tsoa ts'ebetsong eohle ea 20 μl reaction e ne e laetsoe ka tsela e ngoe le e ngoe. Khakanyo ea gel ea agarose e ne e le 2%. Electrophoresis e ne e etsoa tlasa 6 V / cm bakeng sa 20 min. D15000: TIANGEN D15000 Lesupa la DNA.

Q: Ha ho na lihlopha tsa matlafatso

Setšoantšo sa A-1

■ Template e na le litšila tsa protheine kapa li-inhibitors tsa Taq, jj. ——Tlhoekisa template ea DNA, tlosa litšila tsa protheine kapa u ntše template ea DNA ka lisebelisoa tsa tlhoekiso.

■ Tlatsetso ea template ha e felle ——Ho eketsa ka mokhoa o nepahetseng mocheso oa "denaturation" le ho lelefatsa nako ea denaturation.

■ Ho senyeha ha litempele ——Reka template hape.

Tlhahiso ea A-2

■ Boleng bo tlase ba li-primers ——Re kopanya hape selelekela.

■ Ho senyeha ha li-primer——Fana ka litlhahlobo tse phahameng tsa likhakanyo hore e be molumo o monyane bakeng sa ho li boloka. Qoba ho hatsela hangata le ho qhibiliha kapa nako e telele ea 4 ° C e bolokiloeng.

■ Moralo o sa nepahalang oa litlhahlobo (mohlala, bolelele ba lithuso ha boa lekana, botenya bo thehiloe lipakeng tsa lintho tsa pele, jj.

EA-3 Mg²⁺ho tsepamisa maikutlo

■ Mg²⁺ ho tsepamisa mohopolo ho tlase haholo ——Ho eketsa hantle Mg²⁺mahloriso: Lokisetsa Mg²⁺ mahloriso ka letoto la likarabelo ho tloha ho 1 mM ho isa ho 3 mM ka karohano ea 0.5 mM ho fumana Mg²⁺ mahloriso bakeng sa template le primer ka 'ngoe.

Mocheso oa ho koala oa A-4

■ Mocheso o phahameng oa ho koala o ama tlamo ea selelekela le template. Fokotsa mocheso o kenang 'me u ntlafatse boemo ka gradient ea 2 ° C.

Nako ea katoloso ea A-5

■ Nako e khuts'oane ea katoloso —- Eketsa nako ea katoloso.

P: Ho ba le tšoaetso ea bohata

Phenomena: Mehlala e mebe e bonts'a lihlopha tsa tatellano.

Tšilafalo ea A-1 ea PCR

■ Tšilafalo ea sefapano ea tatellano ea sepheo kapa lihlahisoa tsa ntlafatso ——Tlhokomelo hore o se ke oa tšela sampole e nang le tatellano ea sepheo sa sampuli e fosahetseng kapa oa e tšolla ka har'a tube ea centrifuge. Li-reagents kapa lisebelisoa li lokela ho etsoa mochini o ikemetseng ho felisa li-acid tsa nucleic, mme boteng ba tšilafalo bo lokela ho khethoa ka liteko tse mpe tsa taolo.

■ Tšilafalo ea li-reagent ——Qobella li-reagents ebe u li boloka ka mocheso o tlase.

A-2 Tona-khōlōr

■ Mg²⁺ ho tsepamisa mohopolo ho tlase haholo ——Ho eketsa hantle Mg²⁺ mahloriso: Lokisetsa Mg²⁺ mahloriso ka letoto la likarabelo ho tloha ho 1 mM ho isa ho 3 mM ka karohano ea 0.5 mM ho fumana Mg²⁺ mahloriso bakeng sa template le primer ka 'ngoe.

■ Moralo oa semmuso o sa nepahalang, 'me tatellano ea sepheo e na le thuto ea bongoli le tatellano e sa amaneng le sepheo. ——Litlhahlobo tsa pele-pele.

Q: Kholiso e sa tobang

Phenomena: Lihlopha tsa kholiso ea PCR ha li lumellane le boholo bo lebelletsoeng, ebang ke bo boholo kapa bo bonyenyane, kapa ka linako tse ling lihlopha tse ikhethileng tse matlafatsang le lihlopha tse sa ikhethileng tsa matlafatso lia etsahala.

Tlhahiso ea A-1

■ Lintlha tse qalang tsa semmuso

——Re-design ea khale.

■ Khakanyo ea semmuso e phahame haholo —— Ho eketsa mocheso oa denaturation hantle le ho lelefatsa nako ea denaturation.

Mofuta oa A-2 Mg²⁺ ho tsepamisa maikutlo

■ Mokha oa Mg²⁺ mahloriso a phahame haholo -— Fokotsa hantle mohopolo oa Mg2 +: Lokisetsa Mg²⁺ mahloriso ka letoto la likarabelo ho tloha ho 1 mM ho isa ho 3 mM ka karohano ea 0.5 mM ho fumana Mg²⁺ mahloriso bakeng sa template le primer ka 'ngoe.

A-3 Thermostable polymerase

■ Palo ea enzyme e fetelletseng —— Fokotsa palo ea enzyme ka nepo ka linako tse ling tsa 0.5 U.

Mocheso oa ho koala oa A-4

■ Mocheso o kenyang letsoho o tlase haholo —— Ho eketsa mocheso oa ho koala ka nepo kapa ho sebelisa mokhoa oa mekhahlelo e 'meli

Lipotoloho tsa A-5 PCR

■ Lipotoloho tse ngata tsa PCR ——Ho fokotsa palo ea lipotoloho tsa PCR.

P: Lihlopha tse hlabang kapa tse tlotsang

Tlhahiso ea A-1—— Boemo bo ikgethang ba maemo a mabe— - Iketsetse meralo ea mantlha, fetola boemo le bolelele ba semmuso ho ntlafatsa botumo ba eona; kapa ho etsa sehlaha sa PCR.

DNA ea A-2

——Thempleite ha e ea hloeka— - Hloekisa template kapa u ntše DNA e nang le lisebelisoa tsa tlhoekiso.

EA-3 Mg²⁺ ho tsepamisa maikutlo

——Mahl²⁺ ho tsepamisa mohopolo ho phahame haholo -— Fokotsa hantle Mg²⁺ mahloriso: Lokisetsa Mg²⁺ mahloriso ka letoto la likarabelo ho tloha ho 1 mM ho isa ho 3 mM ka karohano ea 0.5 mM ho fumana Mg²⁺ mahloriso bakeng sa template le primer ka 'ngoe.

E-4 dNTP

——Khokahano ea li-dNTP li holimo haholo —— Fokotsa mohopolo oa dNTP ka nepo

Mocheso oa Annealing oa 5

——Thempereichara e tlaase e kenang ——Ho eketsa hantle mocheso o tlatsetsang

Lipotoloho tsa A-6

—Kenale palo ea potoloho

P: Ke template ea bokae ea DNA e lokelang ho kenyelletsoa ho 50 μl PCR reaction system?

P: U ka holisa likaroloana tse telele joang?

Mohato oa pele ke ho khetha polymerase e loketseng. Kamehla Taq polymerase e ke ke ea bala liphoso ka lebaka la ho haelloa ke ts'ebetso ea 3'-5 'ea tokollo,' me ho se tšoane hantle ho tla fokotsa ts'ebetso ea likhechana. Ka hona, Taq polymerase e tloaelehileng e ke ke ea holisa hantle likaroloana tsa sepheo tse kholo ho feta 5 kb. Taq polymerase e nang le phetoho e khethehileng kapa botšepehi bo phahameng ba polymerase e lokela ho khethoa ho ntlafatsa katleho le ho fihlela litlhoko tsa sehlotšoana se selelele. Ntle le moo, kholiso ea likhechana tse telele e boetse e hloka phetoho e tsamaellanang ea moralo oa khale, nako ea denaturation, nako ea katoloso, pH ea buffer, jj. Hangata, li-primers tse nang le 18-24 bp li ka lebisa ho chai e ngata. Bakeng sa ho thibela tšenyo ea template, nako ea denaturation ho 94 ° C e lokela ho fokotsoa ho isa ho 30 sec kapa ka tlase ho potoloho, mme nako ea ho nyoloha mocheso ho ea ho 94 ° C pele amplification e lokela ho ba tlase ho 1 min. Ho feta moo, ho beha mocheso oa katoloso ka 68 ° C le ho rala nako ea katoloso ho latela sekhahla sa 1 kb / min ho ka netefatsa kholiso e sebetsang ea likhechana tse telele.

Q: U ka ntlafatsa ts'epahalo ea kholiso ea PCR joang?

Sekhahla sa phoso ea kholiso ea PCR se ka fokotsoa ka ho sebelisa li-polymerase tse fapaneng tsa DNA ka bots'epehi bo phahameng. Har'a li-polymerase tsohle tsa Taq DNA tse fumanehang ho fihlela joale, enzyme ea Pfu e na le sekhahla se tlase sa phoso le botšepehi bo phahameng ho fetisisa (bona tafole e hoketsoeng). Ntle le khetho ea enzyme, bafuputsi ba ka tsoela pele ho fokotsa sekhahla sa phetoho ea PCR ka ho ntlafatsa maemo a karabelo, ho kenyeletsoa le ho ntlafatsa sebopeho sa buffer, polasetiki ea thermostable polymerase le ho ntlafatsa palo ea potoloho ea PCR.

Ngola molaetsa oa hau mona ebe u o romella ho rona