Setsi sa Mutagenesis Kit se Potlakileng

Phetoho ea sebaka se le seng se potlakileng kapa sa libaka tse ngata tse fapaneng ho lefutso le shebiloeng ho vector e shebiloeng.

Mutagenesis in-vitro e tataisoang ke sebaka ke mokhoa oa bohlokoa oa liteko mefuteng e fapaneng ea baeloji le bongaka, e sebelisoang haholo ho ntlafatsa le ho ntlafatsa liphatsa tsa lefutso, ho lekola libaka tsa taolo tsa baphatlalatsi, le ho ithuta kamano e rarahaneng lipakeng tsa sebopeho sa protheine le ts'ebetso. Setsi sena se sebelisa theknoloji e etellang pele ea morao-rao ho etsa phetoho e le 'ngoe ea sebaka sa marang-rang, phetoho ea libaka tse ngata tsa marang-rang hammoho le ho kenya kapa ho hlakola phetoho ea mofuta o lebisitsoeng. Sekhahla sa phetoho ea sebaka se le seng sa phetoho se ka fihla ho feta 90%. Ntle le moo, ho fapana le lisebelisoa tsa moetlo tse hlokang liphetoho tse ngata tsa PCR, li-cloning tse nyane le mehato e meng e jang nako le e jang basebetsi, ts'ebetso ea kit e bonolo, mme ho hlokahala mehato e mene feela ho aha khatello ea phetoho.

Katse. Che	Paka Size
44992901	20 rxn

Romela ya imeile ho re

Product Qaqileng

LBH

Lihlahisoa tsa Product

Likaroloana

■ E bonolo ebile e potlakile: Thepa e amohela theknoloji e matlafatsang e sa sebeliseng thapo E hloka feela mehato e mene ho hlokomela phetoho ho tloha mofuteng oa mofuta o hlaha ho ea mofuteng o sa fetoheng, ntle le mehato e jang nako le e sebelisang basebetsi joalo ka makhetlo a mangata a PCR le sub-cloning.
■ selelekela se sebetsang hantle haholo: Sesebelisoa se amohela molao-motheo oa moralo o kopaneng o kopaneng, e le hore li-plasmids tse ngata tse ka fetohang li ka fumaneha ka ho holisa.
■ Ho sebetsa ka bophara: Kit ha e khone ho etsa phetoho e le 'ngoe feela, empa hape e ka etsa phetoho ea libaka tse ngata. E ka fetola libaka tsa 5.
■ Ho ikamahanya le maemo ka matla: Thepa e ka etsa phetoho e lebisitsoeng setsing ho li-plasmids tse boholo bo boholo ba 10 kb, e koahelang li-plasmids tsohle tse sebelisoang hangata.
■ Sekhahla se phahameng sa phetoho: sesebelisoa se na le ts'ebetso ea ho sila habeli ha litempele tsa methylated plasmid in vitro le in vivo, ho netefatsa sekhahla se phahameng sa phetoho.

Site-Mutation Reaction Setup le Lenaneo la PCR

■ Bakeng sa phetoho e le 'ngoe ea sebaka se le seng sa pele, sekhahla sa phetoho se tla ba tlase ho feta sa phetoho e le' ngoe ea sebaka ka lebaka la palo e eketsehileng ea libaka tsa phetoho. Ho ea ka tlhaiso-leseling ea rona ea liteko, ha palo ea libaka tsa phetoho e fihla ho 5, sekhahla se nepahetseng sa phetoho se tla fokotsoa ho ba 50%. Ka hona, ntlheng ena ho kgothaletswa ho eketsa palo ea li-clones tse netefalitsoeng.
■ Setsi sena se ts'ehetsa ho fetoha ha libaka tse ngata tse fapaneng, e le hore liteko tsa phetoho li ka etsoa ka nako e le ngoe ka mefuta e mengata ea liphatsa tsa lefutso. Moeli o kaholimo oa libaka tsa phetoho e ntse e le 5.
■ Ho khothaletsoa hore li-plasmids tsa taolo le li-primer tse fanoeng ka har'a kit e lokela ho sebelisoa ha ho etsoa liteko tse ncha tsa phetoho e le ho tsamaisa tlhahlobo ea mathata a liteko.

Fast Site-Directed Mutagenesis Kit

Lihlahisoa tsohle li ka fetoloa bakeng sa ODM / OEM. Bakeng sa lintlha,ka kopo tlanya Customized Service (ODM / OEM)

E fetileng: Lisele tsa Mouse Direct PCR Kit

E 'ngoe: 2 × Pfu PCR Motsoako

Q: Ha ho na lihlopha tsa matlafatso

Setšoantšo sa A-1

■ Template e na le litšila tsa protheine kapa li-inhibitors tsa Taq, jj. ——Tlhoekisa template ea DNA, tlosa litšila tsa protheine kapa u ntše template ea DNA ka lisebelisoa tsa tlhoekiso.

■ Tlatsetso ea template ha e felle ——Ho eketsa ka mokhoa o nepahetseng mocheso oa "denaturation" le ho lelefatsa nako ea denaturation.

■ Ho senyeha ha litempele ——Reka template hape.

Tlhahiso ea A-2

■ Boleng bo tlase ba li-primers ——Re kopanya hape selelekela.

■ Ho senyeha ha li-primer——Fana ka litlhahlobo tse phahameng tsa likhakanyo hore e be molumo o monyane bakeng sa ho li boloka. Qoba ho hatsela hangata le ho qhibiliha kapa nako e telele ea 4 ° C e bolokiloeng.

■ Moralo o sa nepahalang oa litlhahlobo (mohlala, bolelele ba lithuso ha boa lekana, botenya bo thehiloe lipakeng tsa lintho tsa pele, jj.

EA-3 Mg²⁺ho tsepamisa maikutlo

■ Mg²⁺ ho tsepamisa mohopolo ho tlase haholo ——Ho eketsa hantle Mg²⁺mahloriso: Lokisetsa Mg²⁺ mahloriso ka letoto la likarabelo ho tloha ho 1 mM ho isa ho 3 mM ka karohano ea 0.5 mM ho fumana Mg²⁺ mahloriso bakeng sa template le primer ka 'ngoe.

Mocheso oa ho koala oa A-4

■ Mocheso o phahameng oa ho koala o ama tlamo ea selelekela le template. Fokotsa mocheso o kenang 'me u ntlafatse boemo ka gradient ea 2 ° C.

Nako ea katoloso ea A-5

■ Nako e khuts'oane ea katoloso —- Eketsa nako ea katoloso.

P: Ho ba le tšoaetso ea bohata

Phenomena: Mehlala e mebe e bonts'a lihlopha tsa tatellano.

Tšilafalo ea A-1 ea PCR

■ Tšilafalo ea sefapano ea tatellano ea sepheo kapa lihlahisoa tsa ntlafatso ——Tlhokomelo hore o se ke oa tšela sampole e nang le tatellano ea sepheo sa sampuli e fosahetseng kapa oa e tšolla ka har'a tube ea centrifuge. Li-reagents kapa lisebelisoa li lokela ho etsoa mochini o ikemetseng ho felisa li-acid tsa nucleic, mme boteng ba tšilafalo bo lokela ho khethoa ka liteko tse mpe tsa taolo.

■ Tšilafalo ea li-reagent ——Qobella li-reagents ebe u li boloka ka mocheso o tlase.

A-2 Tona-khōlōr

■ Mg²⁺ ho tsepamisa mohopolo ho tlase haholo ——Ho eketsa hantle Mg²⁺ mahloriso: Lokisetsa Mg²⁺ mahloriso ka letoto la likarabelo ho tloha ho 1 mM ho isa ho 3 mM ka karohano ea 0.5 mM ho fumana Mg²⁺ mahloriso bakeng sa template le primer ka 'ngoe.

■ Moralo oa semmuso o sa nepahalang, 'me tatellano ea sepheo e na le thuto ea bongoli le tatellano e sa amaneng le sepheo. ——Litlhahlobo tsa pele-pele.

Q: Kholiso e sa tobang

Phenomena: Lihlopha tsa kholiso ea PCR ha li lumellane le boholo bo lebelletsoeng, ebang ke bo boholo kapa bo bonyenyane, kapa ka linako tse ling lihlopha tse ikhethileng tse matlafatsang le lihlopha tse sa ikhethileng tsa matlafatso lia etsahala.

Tlhahiso ea A-1

■ Lintlha tse qalang tsa semmuso

——Re-design ea khale.

■ Khakanyo ea semmuso e phahame haholo —— Ho eketsa mocheso oa denaturation hantle le ho lelefatsa nako ea denaturation.

Mofuta oa A-2 Mg²⁺ ho tsepamisa maikutlo

■ Mokha oa Mg²⁺ mahloriso a phahame haholo -— Fokotsa hantle mohopolo oa Mg2 +: Lokisetsa Mg²⁺ mahloriso ka letoto la likarabelo ho tloha ho 1 mM ho isa ho 3 mM ka karohano ea 0.5 mM ho fumana Mg²⁺ mahloriso bakeng sa template le primer ka 'ngoe.

A-3 Thermostable polymerase

■ Palo ea enzyme e fetelletseng —— Fokotsa palo ea enzyme ka nepo ka linako tse ling tsa 0.5 U.

Mocheso oa ho koala oa A-4

■ Mocheso o kenyang letsoho o tlase haholo —— Ho eketsa mocheso oa ho koala ka nepo kapa ho sebelisa mokhoa oa mekhahlelo e 'meli

Lipotoloho tsa A-5 PCR

■ Lipotoloho tse ngata tsa PCR ——Ho fokotsa palo ea lipotoloho tsa PCR.

P: Lihlopha tse hlabang kapa tse tlotsang

Tlhahiso ea A-1—— Boemo bo ikgethang ba maemo a mabe— - Iketsetse meralo ea mantlha, fetola boemo le bolelele ba semmuso ho ntlafatsa botumo ba eona; kapa ho etsa sehlaha sa PCR.

DNA ea A-2

——Thempleite ha e ea hloeka— - Hloekisa template kapa u ntše DNA e nang le lisebelisoa tsa tlhoekiso.

EA-3 Mg²⁺ ho tsepamisa maikutlo

——Mahl²⁺ ho tsepamisa mohopolo ho phahame haholo -— Fokotsa hantle Mg²⁺ mahloriso: Lokisetsa Mg²⁺ mahloriso ka letoto la likarabelo ho tloha ho 1 mM ho isa ho 3 mM ka karohano ea 0.5 mM ho fumana Mg²⁺ mahloriso bakeng sa template le primer ka 'ngoe.

E-4 dNTP

——Khokahano ea li-dNTP li holimo haholo —— Fokotsa mohopolo oa dNTP ka nepo

Mocheso oa Annealing oa 5

——Thempereichara e tlaase e kenang ——Ho eketsa hantle mocheso o tlatsetsang

Lipotoloho tsa A-6

—Kenale palo ea potoloho

P: Ke template ea bokae ea DNA e lokelang ho kenyelletsoa ho 50 μl PCR reaction system?

P: U ka holisa likaroloana tse telele joang?

Mohato oa pele ke ho khetha polymerase e loketseng. Kamehla Taq polymerase e ke ke ea bala liphoso ka lebaka la ho haelloa ke ts'ebetso ea 3'-5 'ea tokollo,' me ho se tšoane hantle ho tla fokotsa ts'ebetso ea likhechana. Ka hona, Taq polymerase e tloaelehileng e ke ke ea holisa hantle likaroloana tsa sepheo tse kholo ho feta 5 kb. Taq polymerase e nang le phetoho e khethehileng kapa botšepehi bo phahameng ba polymerase e lokela ho khethoa ho ntlafatsa katleho le ho fihlela litlhoko tsa sehlotšoana se selelele. Ntle le moo, kholiso ea likhechana tse telele e boetse e hloka phetoho e tsamaellanang ea moralo oa khale, nako ea denaturation, nako ea katoloso, pH ea buffer, jj. Hangata, li-primers tse nang le 18-24 bp li ka lebisa ho chai e ngata. Bakeng sa ho thibela tšenyo ea template, nako ea denaturation ho 94 ° C e lokela ho fokotsoa ho isa ho 30 sec kapa ka tlase ho potoloho, mme nako ea ho nyoloha mocheso ho ea ho 94 ° C pele amplification e lokela ho ba tlase ho 1 min. Ho feta moo, ho beha mocheso oa katoloso ka 68 ° C le ho rala nako ea katoloso ho latela sekhahla sa 1 kb / min ho ka netefatsa kholiso e sebetsang ea likhechana tse telele.

Q: U ka ntlafatsa ts'epahalo ea kholiso ea PCR joang?

Sekhahla sa phoso ea kholiso ea PCR se ka fokotsoa ka ho sebelisa li-polymerase tse fapaneng tsa DNA ka bots'epehi bo phahameng. Har'a li-polymerase tsohle tsa Taq DNA tse fumanehang ho fihlela joale, enzyme ea Pfu e na le sekhahla se tlase sa phoso le botšepehi bo phahameng ho fetisisa (bona tafole e hoketsoeng). Ntle le khetho ea enzyme, bafuputsi ba ka tsoela pele ho fokotsa sekhahla sa phetoho ea PCR ka ho ntlafatsa maemo a karabelo, ho kenyeletsoa le ho ntlafatsa sebopeho sa buffer, polasetiki ea thermostable polymerase le ho ntlafatsa palo ea potoloho ea PCR.

Ngola molaetsa oa hau mona ebe u o romella ho rona